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BrdU檢測-免疫熒光法

Brdu細胞增殖檢測 BrdU作為一種胸腺嘧啶核苷的類似物(其化學結構特點是胸腺嘧啶的堿基嘧啶環上與5位C原子連接的甲基細胞合成的DNA中。當細胞處于DNA合成期而同時又有BrdU存在時, 就會有BrdU摻入新合成的DNA中,只要中長期存留。 

操作步驟 

1. 細胞以1.5×105 /ml細胞數接種于直徑35ml培養皿中(內放置一蓋玻片),培養1天,用含0.4%FC G0 期。

2. 終止細胞培養前,加入BrdU(終濃度為30μg/L),37℃,孵育40min。

3. 棄培養液,玻片用PBS洗滌3次。

4. 甲醇/醋酸固定10min。

5. 經固定的玻片空氣干燥,0.3%H2 O2 -甲醇30min滅活內源性氧化酶。

6. 5%正常兔血清封閉。

7. 甲酰胺100℃,5min變性核酸。

8. 冰浴冷卻后PBS洗滌,加1抗即抗小鼠BrdU單抗(工作濃度1:50),陰性對照加PBS或血清。 9. 按ABC法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性 

細胞增殖的流式檢測BrdU法 

客戶提供 

1. 提供新鮮的肝素或者EDTA抗凝的外周血;

2. 提供新鮮的培養細胞,提供新鮮組織,需要實驗室制備成單細胞懸液。

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收費標準/服務周期/提供結果: 

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