MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。 

檢測步驟 

◆ 1.將細胞板放置于無菌操作臺中（細菌可以導致MTT比色OD值的升高） 

◆ 2.在每管MTT(5 mg/每管)中加入1 mL MTT Solvent溶解。在細胞板中每孔加入10%體積的MTT溶液。 注：MTT 對光敏感。重溶的MTT溶液凍存于0℃以下時的穩定性可至少保持6個月。重溶的MTT溶液如保存于2 - 8℃超過2周，則可能會降解，導致錯誤的結果。 

◆ 3.將細胞板放回培養箱中繼續孵育3 - 4小時。做對比試驗時，孵育時間需一致。 

◆ 4.孵育后將細胞板從培養箱中拿出，按照下面的方法溶解產生的MTT甲臜結晶物。 

a. 如果是貼壁細胞，則棄去培養基。加入與初始體積等量的Formazan Solvent。每孔的溶解液體積可能不同，但為了方便比較，總體積須保持一致。 

b. 如果是非貼壁細胞先離心去除上清液，再加入與初始體積等量的Formazan Solvent。

c. 加入 Formazan Solvent后，須在1小時內完成讀數。 

◆ 5.在搖床中溫和地振蕩可增強溶解。某些情況下，尤其是細胞密度較高時，需要反復吹打使MTT甲臜結晶物完全溶解。 

◆ 6.將細胞板放置于無菌操作臺中（細菌可以導致MTT比色OD值的升高）。

注意事項 

◆ 1. 一般情況下，96孔培養板內貼壁細胞長滿時約有105個細胞。但由于不同細胞貼壁后面積差異很大，因此，在進行MTT試驗前，要進行預實驗檢測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數條件下的生長曲線，確定試驗中每孔的接種細胞數和培養時間，保證MTT結晶形成的量與細胞數呈線性關系； 

◆ 2. 為了得到結果，細胞數量應在對數生長期進行測定。每次檢測需包括不含細胞的培養基作為空白對照； 

◆ 3. 細胞消化會影響細胞的活性，進而影響OD值。容易消化的細胞，消化時胰蛋白酶中不添加EDTA，消化時也僅需胰酶浸潤數秒即可；難以消化的細胞，胰蛋白酶中需添加濃度為0.25%的EDTA； 

◆ 4. MTT轉化為甲臜是依賴于細胞類型的。由于相同細胞系不同細胞株之間的差異，以及細胞的生理狀態影響，因此推薦研究者建立自己的吸光度/細胞數量曲線； 

◆ 5.細菌、支原體和其他微生物污染可能會使MTT四唑環斷裂，不能用該方法測定； 

◆ 6. 用含15%胎牛血清培養液培養細胞時，高的血清物質會影響試驗孔的光吸收值，增加試驗本底。因此，一般選含小于10%胎牛血清的培養液進行。在呈色后，盡量吸凈培養孔內殘余培養液。 

◆ 7. CCK-8法也是常見的細胞增殖檢測方法，底物被細胞中的脫氫酶還原，生成黃色的產物(甲瓚)，可溶于培養基。相較于MTT，CCK-8

具有如下優點：

①單一組分，無需預混，即開即用；

②操作簡便，只需一步即可得到結果；

③無需放射性同位素和有機溶劑，對細胞毒性低；

④水溶液，無需換液，尤其適合懸浮細胞。 

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