急性脊髓損傷(ASCI)小鼠模型的建模方法 

模式動物品系：SPF級ICR小鼠，健康，雄性，8~12W 

實驗分組：

實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組。 

實驗周期：4-6 weeks 

建模方法： 

1、取 ICR 小鼠，戊Ba比妥鈉麻醉后，采用椎板切除術暴露 T9-T10 處脊髓。然后采用脊髓打擊器，于暴 露脊髓處施加 90 kilodynes 的力造成挫傷型脊髓損傷，SCI 后連續 10 天每天肌肉注射慶大霉素 （8mg/kg）防止術后感染，并每天兩次人工膀胱按壓擠尿直至恢復自主膀胱活動為止（防止尿潴留）。 2、處理一周后進行 BBB 評分評估小鼠后肢運動能力； 

3、BBB score=0 時，則模型構建成功。將構模成功的小鼠分為兩組，每組 8只，于挫傷型 SCI 處理 1week 后，于大鼠尾靜脈處進行注射處理（模型組只注射生理鹽水，治療組注射含有受試藥物的生理鹽水 ）。 

4、SCI 后，16 只小鼠飼養 3week 時，根據SCI后 3 week 結果每組取 3 只效果最顯著的小鼠取脊髓進行 病理學檢測，剩余 10 只小鼠繼續飼養并與5week，7week，9week進行BBB 評分和機械觸誘發痛檢測。 SCI后 9week 時所有受損脊髓中心進行凍存或 OCT 包埋。 

模型評價 

1. BBB test

于藥物注射后每隔一周進行 BBB test，直至移植后 8 周（即 SCI 后 3week、5week、7week、9week）。 藥物注射后 2 周（即 SCI 后 3week）共 16 只小鼠進行行為學檢測數據，選擇變化顯著的 3 只小鼠（每組 3 只，即 6 只小鼠）的脊髓組織進行病理學檢測。 剩余 5 只小鼠（每組 5 只，即 10 只小鼠）依舊隔一周（即 SCI 后 5week、7week、9week）進行 BBB test。分值范圍為0-21分，其中0分代表后肢完全失去運動功能，21分代表后肢運動功能基本正常。

2. Mechanical allodynia test （機械觸誘發痛檢測）

使用 Von Frey 測痛套件，記錄縮足的壓力（g），2 分鐘時間間隔內測量 4 次，剔除最大值和最小值后獲 取的中間值作為痛閾（g）。 

脊髓損傷模型的建立及術后小鼠情況： 

所有實驗小鼠在打擊時均出現痙攣性擺尾，雙下肢及軀體回縮撲動，隨后雙下肢癱瘓，損傷節段脊髓硬膜 完整、出血、水腫。所有麻醉后小鼠于術后蘇醒，出現雙下肢癱瘓，運動、感覺功能喪失，依靠雙上肢移 動軀體，頭頸部活動正常。術后1d，所有小鼠BBB評分均小于1分，活動明顯減少，進食、飲水量減少， 協助排尿7d后大部分小鼠恢復自主排尿功能。 機械觸誘發痛檢測： 將小鼠置于金屬網格的架子上使之適應環境，采用Von Frey絲自足底下方垂直剌激后爪底皮膚表面，能引 起陽性縮爪反應所需的最低力度記為縮爪閾值，造模后小鼠的PWTs值較正常小鼠均下降。 

組織病理學 

3.免疫熒光 

藥物注射后兩周，取受損脊髓組織，石蠟切片后，檢測其中 MAP-1 的表達分布，
4.小膠質細胞/巨噬細胞檢測- 激光共聚焦
藥物注射后兩周，取受損脊髓組織，石蠟切片后，檢測其中 ED1(小膠質細胞/巨噬細胞活化marker)。

需確認的信息 

1. 模型種屬（大鼠還是小鼠或是其他種屬）

2. 動物體重有無要求，年齡有無要求

3. 雌雄有無要求

4. 模型構建具體方案

5. 取材要求（采血、取組織樣本）