糖尿病眼病模型免疫代謝系統模型

糖尿病是全身代謝性疾病，對眼的各個部位都會造成病變，其中最常見的，對視力影響最大的是視網膜病變。臨床研究表明，糖尿病眼病與病程關系很大。另外，國際糖尿病研究資料也證實，患糖尿病8年后視網膜病變占50%。

原型物種：人

來源：鏈脲佐菌素（STZ）導致糖尿病，并誘導視網膜病變

模式動物品系：SPF 級SD大鼠，雄性，8 周

實驗分組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組

實驗周期：8~10 weeks

建模方法：

適應性飼養1周后進行建模。糖尿病組建模前禁食16h，稱重空腹體重，尾靜脈取血測定血糖濃度，一次性腹腔注射鏈脲佐菌素STZ（65mg/kg），72h、96h、120h后應用穩步血糖測定儀檢測隨機血糖，測定體重，觀察一般情況如體型及毛發顏色變化。每組取尾靜脈血測量血糖，連續3次血糖≥16.7mmol/L，并出現典型的“三多一少”癥狀者，即可確定為糖尿病小鼠。

健康對照組將STZ改為等體積生理鹽水，其它步驟相同。

取材：造模后6周處死，取左眼及右眼視網膜。

制備視網膜消化鋪片：大鼠麻醉后斷頭處死，取眼球，4%多聚Jia醛固定24~48h，自睫狀體后部近鋸齒緣剪開鞏膜，去掉眼晶狀體和玻璃體，將眼后段平均分成3份，在水中輕輕漂取視網膜；清水漂洗2~3h。將視網膜放人用3%胰蛋白酶消化溶液中，在37°C恒溫箱中孵育2~3h，將視網膜輕輕移人蒸餾水中，輕輕吹打，使殘余的視網膜神經成分及內界膜完全脫去，剩下一層透明的視網膜血管網，移到載坡片上盡量鋪平，自然干燥。

模型評價：

1.視網膜血管染色

將模型小鼠與對照組健康小鼠頸椎脫臼處死，迅速摘取眼球，眼球置于PBS中小心、快速地將視網膜分離出來，以視乳頭為中心做個放射狀切開，將視網膜平鋪鋪片，進行ADP酶血管染色。

對照組視網膜血管自視盤發出，向四周呈放射狀均勻分布，管徑較粗，分支良好，能分辨出深淺兩層血管網。

模型組視網膜中央血管見無灌注區，血管減少，毛細血管喪失。

組織病理學

1.視網膜HE染色

將模型小鼠與對照組健康小鼠頸椎脫臼處死，迅速摘取眼球，4%多聚Jia醛固定。完成固定后，流水沖洗，于距齒緣后0.5mm處剪開眼球壁，小心地去除角膜、眼前節和玻璃體，切取視網膜組織，制備石蠟切片；進行HE染色。

2.視網膜消化鋪片的免疫組織化學檢測；

在制備視網膜鋪片后，進行IHC檢測。

3.QPCR檢測：PI3K、Akt-1 mRNA水平

4.WB定性檢測：PTEN、BAD；