剛果紅的原理:
剛果紅篩選主要是根據菌落降解纖維素,可以形成降解圈,氯化鈉沖洗再烘干后可以讓降解圈看的更清楚,更易觀察、它可以與 像纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物,但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發生這種反應.在含有纖維素的培養基中加入 剛果紅染色后,再Nacl用漂洗,Nacl可以使結合不牢的剛果紅洗去,這樣就留下大大小小的透明圈。
實驗步驟:
1、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自來 水洗。
2、剛果紅染色:切片入剛果紅染液1h,自來水洗2min。
3、背景分化:氫氧花鉀溶液分化,至陽性斑塊明顯,背景基本無色,自來水洗。 4、蘇木素染色:切片入蘇木素染液染3-5min,自來水洗,分化液分化,自來水洗,返藍液返藍,流水沖洗。
4、脫水封片:切片依次放入無水乙醇I 5min -無水乙醇II 5min-無水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明,中性樹膠 封片。
5、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。 結果判讀: 淀粉樣蛋白呈紅色,細胞核呈淺藍色。
注意事項:
1、區分甲狀腺膠質、彈力纖維和膠原纖維,可能都會染成紅色;
2、分化時要掌握恰當,分化不足,膠原纖維也呈紅色,分化過度,淀粉樣變蛋白也可脫色。
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