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富爾根染色

顯示DNA的傳統方法是富爾根(Feulgen)反應,切片先用稀鹽酸處理,DNA經弱酸(1mol/L HCL)水解后,在60℃條件 下使DNA分子中脫氧核糖與嘌呤之間的連接打開,脫氧核糖的一端釋放出醛基,并在原位與Schiff試劑反應生成紫紅色產 物。 原理同PAS反應,使細胞核DNA顯紫紅色。在此過程中RNA不受影響,故染色具有DNA特異性。準確的溫度和鹽酸濃度, 適宜的水解時間是成功的關鍵。水解過度或不足均降低染色強度。 

配制試劑: 

1.1mol/L HCL:將8.5ml濃鹽酸和91.5ml蒸餾水混合即得; 

2.0.5%亮綠水溶液; 

染色步驟: 

1.取培養于蓋玻片上的貼壁原代細胞,用Hanks液漂洗三次; 

2.在卡諾(Carnoy)固定液中固定10min,然后蒸餾水洗三次; 

3.移入60℃濃度為1mol/L的HCL中靜置10min; 

4.用蒸餾水漂洗幾次; 

5.放入Schiff試劑中靜置30—60min,可隨時檢查顯色情況; 

6.用自來水沖洗5min; 

7.再用蒸餾水漂洗; 

8.不同濃度梯度乙醇溶液脫水; 

9.用二甲苯透明、樹膠封片; 結果: 原代細胞核內DNA顯紫紅色,細胞質呈綠色。 

結果展示:


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