鍍銀染色指把固定后 的組織或切片浸于銀溶液中，再用還原劑處 理，使銀顆粒沉著于軸索的軸漿中，使之呈 現深棕色或黑 色，是神經元和神經纖維的主 要染色法。 

鍍銀后可在神經元胞漿內看到許多交錯成網的細絲，并伸入樹突及軸突之中，這在HE染色中是看不到的。某些疾病時，神 經元纖維集結.可用鍍銀染色清晰地顯示。

鍍銀法染色方法 

（1）清洗玻片 選擇光滑無裂痕的玻片，最好選用新的。為了避免玻片相互重疊，應將玻片插在專用金屬架上，然后將玻片 置洗衣粉過濾液中（洗衣粉煮沸后用濾紙過濾，以除去粗顆粒），煮沸20min。取出稍冷后用自來水沖洗、晾干，再放入濃 洗液中浸泡5—6天，使用前取出玻片，用自來水沖去殘酸，再用蒸餾水洗。將水瀝干后，放入95%乙醇中脫水。 

（2）菌液的制備及制片：菌齡較老的細菌容易失落鞭毛，所以在染色前應將待染細菌在新配制的半固體牛肉膏蛋白胨培養 基斜面上（培養基表面濕潤，斜面基部含有冷凝水）。用消過毒的蓋玻片切取培養基邊緣的小塊瓊脂放進試管中，注意要輕 放并輕輕搖動，將該試管放在37℃恒溫箱中靜置10min（放置時間不宜太長，否則鞭毛會脫落），讓幼齡菌的鞭毛松展開。 然后，吸取少量菌液滴在潔凈玻片的一端，立即將玻片傾斜，使菌液緩慢地流向另一端，用吸水紙吸去多余的菌液。涂片放 空氣中自然干燥。要注意的是菌液的含菌數量一定要少! 

干燥后的處理 

（1）干燥后用稀鹽酸或稀氫氧花鈉滴,并立即傾斜玻片,使酸(堿)液流下,并自然干燥. 

（2）用沖稀的頭發頂型劑滴加,處理一到三分鐘(具體的要實驗才能知道),并自然干燥. 用于鞭毛染色的菌體是用半固體培養基才用支點法培養的。方法是將0.3-0.4%的瓊脂肉膏培養基熔化后倒入無菌平皿中，在 培養皿中間放三塊成分減半（但是NaCl不減半,瓊脂為正常百分比）的，恒溫培養12-24h后，取擴散菌落的邊緣制作涂片。 

（3）染色 ①滴加A液，染4—6min。 ②用蒸餾水充分洗凈A液。 ③用B液沖去殘水，再加B液于玻片上，在酒精燈火焰上加熱至冒氣，約維持0.5—1min（加熱時應隨時補充蒸發掉的染料， 不可使玻片出現干涸區）。 ④用蒸餾水洗，自然干燥。 

（4）鏡檢：先低倍，再高倍，最后用油鏡檢查。 結果：菌體呈深褐色，鞭毛呈淺褐色。

注意事項： 

1．要選好菌種。一般用周生鞭毛菌（如普通變形桿菌Proteus vulgaris）較好，這類菌的鞭毛多而長易于觀察。 

2．要注意培養條件和培養時間： ①用點接法在新配制的牛肉膏蛋白胨半固體平板上接種。一般一個平板點接3～4處。經比較用半固體培養基培養出來的菌體 活動度大，鞭毛長且多，易于染色，這可能與半固體培養基更適于菌體運動、鞭毛生長較好有關。用點接種法在平板上接種 更易于挑取邊緣幼齡的菌體。 ②培養時間要嚴格掌握，一般培養9～12h較好，菌齡超過15h，鞭毛染色效果較差，這可能與老齡菌體活動度降低、鞭毛易 脫落有關。冰箱長期保存的菌種不宜直接用于鞭毛染色，需用新制備的斜面連續轉接2～3次后再染色。 

3．所用玻片的準備： 

①用過的舊載片要選擇光滑無劃痕的，放入已加入洗衣粉的蒸餾水中煮沸（如能預先過濾去渣更好），煮畢冷卻后，清水洗 凈，放入濃洗液中浸泡24h，取出用清水沖洗殘酸，最后用蒸餾水洗凈，瀝干水并放于95％乙醇中脫水，取出后燒去酒精， 即可使用。

②新的載片雖沒有油污、劃痕，但含游離堿較多，所以要用2％鹽酸浸泡幾小時，用自來水沖洗干凈，然后再用蒸餾水洗 凈，瀝干后再用效果較好。

4．染色液一定要新鮮，特別是硝酸銀染色法中更是如此，A染液和B染液最好都現用現配，A液一般不能放置。

5．染色過程中的細節也應充分注意： 

①取菌要取菌落邊緣的幼齡菌體。

②取菌后的接種環在載片上的蒸餾水中輕輕沾幾下即可，不要用力太猛，更不能用接種環大幅度涂開；將載片稍傾斜，使菌 液散開即可，否則鞭毛易脫落，造成染色失敗。

③鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用熱風吹干，不能熱固定，這是由于加熱后菌體易變形，鞭毛易脫落，影響觀察。

④A染液染3～5min，其后用蒸餾水（自來水效果差）沖洗時一定要充分，否則加B染液后，背景很臟，鞭毛不易被觀察到， 影響實驗效果。

⑤加B染液后，將玻片稍加熱（但不能太熱，更不能沸騰或蒸干）使其微冒蒸汽，30～60s，染色效果較不加熱為好。

⑥B染液染完后，用蒸餾水沖洗比用自來水沖洗效果好

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